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    細胞學堂 | 從傳代到換液，養好22RV1
    
        
    更新時間：2023-07-18  |  點擊率：874
    
        
     
    22RV1是來自異種移植(在閹割引起前列腺癌衰退又在其父親的雄性激素信賴型CWR22嫁接后復發的小鼠中連續傳代)的人前列腺癌上皮細胞系[1]。此細胞系表達前列腺特異抗原PSA。二羥基睪丸脂酮可輕微刺激細胞生長，經Western Blot檢測溶解產物與抗雄性激素受體抗體起免疫反應。EGF可刺激細胞生長，但TGFβ-1不能抑制細胞生長。該細胞在裸鼠中成瘤。近年來，研究表明22RV1產生高滴度的人類逆轉錄病毒XMRV(異嗜性小鼠白血病病毒相關病毒)。


    細胞特性
    圖片
    形態
    上皮樣細胞單層貼壁生長
    倍增時間
    ~40 hours
    抗原表達
    前列腺特異性抗原（PSA）
    表達標志物
    雄激素受體
    生長培養基
    RPMI-1640＋10% FBS＋1% P/S
     ? 
    培養注意事項

    1
    該細胞有密度依賴，傳代比例不宜超過1：4；
    2
    細胞復蘇時需要離心去除DMSO，離心接入皿中，靜置兩天，保持培養箱環境穩定。凍存細胞復蘇最初階段，貼壁量少，成簇松散貼壁，但是最終細胞會變平，并且擴散成很好的單層，這個過程需要4-5天時間；
    3

    4

    細胞凍存后復蘇成活率不高，推薦凍存液配比為90%血清+10% DMSO；
    細胞生長緩慢，細胞只能生長到90%的匯合度。

    傳代步驟

    1
    吸出原培養液；

    2
    加入2mL左右PBS，輕輕晃動培養瓶潤洗細胞，吸出PBS丟棄；

    3
    加入1mL左右胰酶，輕輕晃動培養瓶使之浸潤所有細胞；

    4
    放入培養箱消化，消化2- 3分鐘左右，顯微鏡下看到細胞塊中間的細胞明顯分離變圓且自然脫落（細胞一定要徹-底消化下來，全程不要拍打培養瓶）；

    5
    加入3mL含血清的培養基終止消化，輕輕/反復吹打細胞，在顯微鏡下觀察，細胞盡量呈單顆細胞的懸浮液；；

    6
    收集細胞懸液離心，1000-1200rpm（250-300g）/min，3-5分鐘，離心完吸出上清丟棄；

    7
    加入新鮮培養基，吹打幾下混勻細胞即可，按需接種到新培養瓶，補足足量培養基，擰松瓶蓋或使用透氣瓶蓋進行培養；

    8
    檢查培養箱二氧化碳，溫度和水盤。

    換液步驟
    01
    吸出舊培養基并沿培養瓶側邊（非培養細胞容器底部）添加新的培養基；
    02
    每2-3天換液一次；


    傳代比例和頻次
    細胞長滿80%后，按照1：2的比例傳代，2-3天可再次生長到80%；1：3傳代，再次長滿到80%需要3天以上的時間。

    圖片
    細胞正常生長圖片

    圖片
    ATCC圖片


    參
    考
    文
    獻


    [1] Sramkoski RM, Pretlow TG 2nd, Giaconia JM, Pretlow TP, Schwartz S, Sy MS, Marengo SR, Rhim JS, Zhang D, Jacobberger JW. A new human prostate carcinoma cell line, 22Rv1. In Vitro Cell Dev Biol Anim. 1999 Jul-Aug;35(7):403-9. doi: 10.1007/s11626-999-0115-4. PMID: 10462204.

    [2] Knouf EC, Metzger MJ, Mitchell PS, Arroyo JD, Chevillet JR, Tewari M, Miller AD. Multiple integrated copies and high-level production of the human retrovirus XMRV (xenotropic murine leukemia virus-related virus) from 22Rv1 prostate carcinoma cells. J Virol. 2009 Jul;83(14):7353-6. doi: 10.1128/JVI.00546-09. Epub 2009 Apr 29. PMID: 19403664; PMCID: PMC2704771.




    圖片